Glikoneogenez adlı süreç, hücrenin karbonhidrat olmayan kaynaklardan glikoz kazanmasını sağlar. Bununla birlikte, bu işlem glikolizin tam tersi olarak düşünülmemelidir. Glikolizin geri dönüşümsüz (tek yönlü) reaksiyonlarını atlar, ancak geri kalan reaksiyonlar glikolizin tam tersi yönünde gerçekleşir. Bu nedenle, sadece geri dönüşü olmayan glukoneogenez aşamalarını detaylı incelemek daha verimli olacaktır.
Eğer pirüvat glokoneogenesis için ata molekülse 1 (Pirüvat Karboksilaz), 2 (Mitokondriyel Malat Dehidrogenaz) ,3 (Sitoplazmik Malat Dehidrogenaz) ve 4 (Sitoplazmik fosfoenolpirüvat karboksikinaz) enzimlerinin olduğu yol takip edilir. Farklı olarak, laktatın ata molekül olması durumunda a (Laktat Dehidrogenaz), b (Pirüvat karboksilaz) ve c (Mitokondrial fosfoenolpirüvat karboksikinaz) enzimlerinin olduğu yol takip edilir. Her iki yol ile de fosfoenolpirüvata (PEP) varılır.
